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      微生物細(xì)胞大小測(cè)定

      放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2010-05-11
      核心提示:一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;   了解目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺的構(gòu)造和使用原理,掌握微生物細(xì)胞大小的測(cè)定方法。二、實(shí)驗(yàn)原

      一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>

          了解目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺的構(gòu)造和使用原理,掌握微生物細(xì)胞大小的測(cè)定方法。

      二、實(shí)驗(yàn)原理 

      微生物細(xì)胞的大小是微生物重要的形態(tài)特征之一,由于菌體很小,只能在顯微鏡下來(lái)測(cè)量。用于測(cè)量微生物細(xì)胞大小的工具有目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺

       目鏡測(cè)微尺(圖20-1)是一塊圓形片,在片中央把5mm長(zhǎng)度刻成50等分,或把10 mm長(zhǎng)度刻成100等分。測(cè)量時(shí),將其放在接目鏡中的隔板上(此處正好與物鏡放大的中間像重疊)來(lái)測(cè)量經(jīng)顯微鏡放大后的細(xì)胞物象。由于不同目鏡、物鏡組合的放大倍數(shù)不相同,目鏡測(cè)微尺每格實(shí)際表示的長(zhǎng)度也不一樣,因此目鏡測(cè)微尺測(cè)量微生物大小時(shí)須先用置于鏡臺(tái)上的鏡臺(tái)測(cè)微尺校正,以求出在一定放大倍數(shù)下,目鏡測(cè)微尺每小格所代表的相對(duì)長(zhǎng)度。

       鏡臺(tái)測(cè)微尺(圖20-2)是中央部分刻有精確等分線的載片,一般將lmm等分為100格,每格長(zhǎng)l0μm(即0.0lmm),是專門用來(lái)校正目鏡測(cè)微尺的。校正時(shí),將鏡臺(tái)測(cè)微尺放在載物臺(tái)上,

       

       

      20-1目鏡測(cè)微尺


      由于鏡臺(tái)測(cè)微尺與細(xì)胞標(biāo)本是處于同一位置,都要經(jīng)過(guò)物鏡和目鏡的兩次放大成象進(jìn)入視野,即鏡臺(tái)測(cè)微尺隨著顯微鏡總放大倍數(shù)的放大而放大,因此從鏡臺(tái)測(cè)微尺上得到的讀數(shù)就是細(xì)胞的真實(shí)大小,所以用鏡臺(tái)測(cè)微尺的已知長(zhǎng)度在一定放大倍數(shù)下校正目鏡測(cè)微尺,即可求出目鏡測(cè)微尺每格所代表的長(zhǎng)度,然后移去鏡臺(tái)測(cè)微尺,換上待測(cè)標(biāo)本片,用校正好的目鏡測(cè)微尺在同樣放大倍數(shù)下測(cè)量微生物大小。

      三、實(shí)驗(yàn)器材

       1.活材料:釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)斜面菌種、枯草桿菌(Baccillus subtilis)染色標(biāo)本片。

       2.器材:顯微鏡、目鏡測(cè)微尺、鏡臺(tái)測(cè)微尺、蓋片、載片、滴管、雙層瓶、擦鏡紙

      四、實(shí)驗(yàn)方法

          1.目鏡測(cè)微尺的校正  把目鏡的上透鏡旋下,將目鏡測(cè)微尺的刻度朝下輕輕地裝入目鏡的隔板上,把鏡臺(tái)測(cè)微尺置于載物臺(tái)上,刻度朝上。先用低鏡觀察,對(duì)準(zhǔn)焦距,視野中看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度后,轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡,使目鏡測(cè)微尺與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度平行,移動(dòng)推動(dòng)器,使兩尺重疊,再使兩尺的“0”刻度完全重合,定位后,仔細(xì)尋找兩尺第二個(gè)完全重合的刻度(圖20-3),計(jì)數(shù)兩重合刻度之間目鏡測(cè)微尺的格數(shù)和鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù)。因?yàn)殓R臺(tái)測(cè)微尺的刻度每格長(zhǎng)l0μm,所以由下列公式可以算出目鏡測(cè)微尺每格所代表的長(zhǎng)度。

      例如目鏡測(cè)微尺5小格正好與鏡臺(tái)測(cè)微尺5小格重疊,已知鏡臺(tái)測(cè)微尺每小格為l0μm,則目鏡測(cè)微尺上每小格長(zhǎng)度為=5×10μm/5=10μm

          用同法分別校正在高倍鏡下和油鏡下目鏡測(cè)微尺每小格所代表的長(zhǎng)度。

          由于不同顯微鏡及附件的放大倍數(shù)不同,因此校正目鏡測(cè)微尺必須針對(duì)特定的顯微鏡和附件(特定的物鏡、目鏡、鏡筒長(zhǎng)度)進(jìn)行,而且只能在特定的情況下重復(fù)使用,當(dāng)更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時(shí),必須重新校正目鏡測(cè)微尺每一格所代表的長(zhǎng)度。

          2.細(xì)胞大小的測(cè)定

          (1)將酵母菌斜面制成一定濃度的菌懸液10-2

          (2)取一滴酵母菌懸液制成水浸片

          (3)移去鏡臺(tái)測(cè)微尺,換上酵母菌水浸片,先在低鏡下找到目的物,然后在高倍鏡下用目鏡測(cè)微尺來(lái)測(cè)量酵母菌菌體的長(zhǎng),寬各占幾格(不足一格的部分估計(jì)到小數(shù)點(diǎn)后一位數(shù))。測(cè)出的格數(shù)乘上目鏡測(cè)微尺每格的校正值,即等于該菌的長(zhǎng)和寬。一般測(cè)量菌體的大小要在同一個(gè)標(biāo)本片上測(cè)定10—20個(gè)菌體,求出平均值,才能代表該菌的大小。而且一般是用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌體進(jìn)行測(cè)定。

      4)同法用油鏡測(cè)定枯草桿菌染色標(biāo)本的長(zhǎng)和寬。

      五、實(shí)驗(yàn)作業(yè):

      將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下列表格

      20-1   目鏡測(cè)微目尺校正結(jié)果

      物鏡       目尺格數(shù)        臺(tái)尺格數(shù)        目尺校正值(μm)

      10×

      40×

      100×

      20-2  酵母菌大小測(cè)定記錄  (格)

         1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  平均值

      長(zhǎng)

      20-3 枯草桿菌大小測(cè)定記錄  (格)

        細(xì)胞數(shù)   1  2  3  4  5  6  7  8  9  10  11  12  13  14  15  平均值

      長(zhǎng)

      結(jié)果計(jì)算  長(zhǎng)μm=平均格數(shù)×校正值

      寬μm=平均格數(shù)×校正值

      大小表示:寬μm×長(zhǎng)μm

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      關(guān)鍵詞: 微生物 細(xì)胞
       

       
       
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