培養基的滅菌是菌種生產成敗的關鍵，未經滅菌的培養基中存在著大量的微生物，常常導致菌種污染，給生產造成損失，目前菇農普遍采用的滅菌方法是常壓蒸氣滅菌。

常壓蒸氣滅菌的常壓滅菌灶用磚砌成，選直徑110厘米的鐵鍋，用磚砌高100厘米、直徑120厘米的鍋筒，內外用水泥抹光滑。

培養基裝入滅菌鍋后，用較厚的塑料膜和麻袋片把鍋筒口包蓋住，用繩子捆綁結實，然后用旺火猛燒，在最短的時間內將鍋燒開。待塑料膜鼓氣后成饅頭狀時，說明鍋已燒開，滅菌從這時開始計時，要持續8-10小時，確保滅菌徹底，一些菇農往往在滅菌上麻痹大意，因雜菌污染嚴重導致制種失敗。常壓滅菌時要做到“三防止”，一要防止中途降溫，中途不得不得停火，如鍋內達不到100℃，在規定時間內則達不到滅菌的目的。二要防止燒干鍋，在滅菌之前鍋內要加足水，在滅菌過程中，如果鍋內水量不足，要及時從注水口注水。三要防止存在滅菌死角，如鍋底著火部位不均，鍋筒口處僅從一端漏氣等等都可能出現滅菌死角。

二、接種與培養

滅菌后的培養基可進行接種，接種就是將菌種移植到培養基上。從事接種的操作人員，必須樹立嚴格的無菌觀念，使操作者和接種工具處于嚴格的無菌狀態。因此，必須對接種工具進行嚴格的滅菌，對操作環境進行徹底消毒，操作者的手和衣著也要消毒，嚴格遵守無菌操作規程。接種時要在接種箱內或接種室內進行。

接種時，先將接種箱或接種室內雜物清除干凈，用2%來蘇兒噴霧消毒。將待接種的培養基、菌種和所用工具放入接種箱或接種室工作臺上，用福爾馬林和高錳酸鉀熏蒸接種箱、接種室至少半個小時，用量是每立方米空間用5克高錳酸鉀，加10毫升甲醛，接種前用75%的酒精棉擦抹雙手、母種試管或原種瓶外表，然后點燃酒精燈，進行操作。接種完畢，熄滅酒精燈，將已接種好的瓶或袋移至培養室培養。一般一支母種可擴繁原種4-5瓶，一瓶原種可擴繁栽培種40-50瓶或15-20袋。

培養室要保持清潔并調好溫度、濕度和空氣、光照等環境條件，菌種培養的適宜溫度以20-25℃，空氣的相對濕度控制在60%左右為宜。發菌期間要求暗光發菌，培養室要始終保持通風良好的環境條件，按此管理方法，菌種在40天左右就可長滿瓶或袋。長滿瓶（袋）的菌種如果不馬上使用，要放在0-10℃以下的環境中，可保藏1-3個月。