(一)復(fù)核的定義

對(duì)保藏的各類微生物菌種，在接收和保藏過(guò)程中，為保證菌種質(zhì)量而對(duì)鑒定結(jié)果進(jìn)行的核查。包括對(duì)菌種活性、純度、穩(wěn)定性等的檢測(cè)，以及采用最新分類學(xué)觀點(diǎn)對(duì)分類地位發(fā)生變化的菌種的重新鑒定。

(二)復(fù)核菌株的基本信息

復(fù)核記錄應(yīng)標(biāo)明所復(fù)核菌株的以下基本信息：保藏中心名稱、保藏方式、菌株保藏編號(hào)、菌株名稱(原定名)、復(fù)核日期、復(fù)核內(nèi)容及結(jié)果(所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目及各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果)、復(fù)核結(jié)論、復(fù)核人員姓名、中心負(fù)責(zé)人簽字以及需要補(bǔ)充說(shuō)明的有關(guān)內(nèi)容。

(三)存活性檢測(cè)

微生物菌株復(fù)核時(shí)有必要進(jìn)行存活性檢測(cè)。該項(xiàng)檢測(cè)應(yīng)將采用不同保藏方法保存的培養(yǎng)物接種于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基，在合適的條件下培養(yǎng)，檢查其保藏后的生長(zhǎng)情況，確定適用的長(zhǎng)期保藏技術(shù)方法。

(四)純度檢測(cè)

微生物菌種復(fù)核時(shí)必須進(jìn)行純度檢測(cè)。規(guī)定以下兩種檢測(cè)方法同時(shí)進(jìn)行。

1.顯微鏡觀察

全部的細(xì)胞個(gè)體形態(tài)相似，染色反應(yīng)一致或與原純菌的描述一致。

2.培養(yǎng)并確認(rèn)

將培養(yǎng)物制成懸液，重新傾注平板，或平板劃線培養(yǎng)后，所形成的全部菌落形態(tài)一致或相似。

（五)復(fù)核鑒定

1.細(xì)菌的復(fù)核鑒定

針對(duì)具體類群，從以下幾個(gè)方面選擇有代表性、鑒別性的特征特性進(jìn)行復(fù)核鑒定。

(1)顯微形態(tài)觀察

如細(xì)胞形狀、鞭毛、芽孢以及放線菌的菌絲、孢子絲和孢子的觀察；革蘭氏染色和抗酸染色反應(yīng)等。

(2)培養(yǎng)特性

水溶性色素和非水溶性色素的觀察，其他特定培養(yǎng)基上特征的觀察。

(3)細(xì)胞化學(xué)組分分析

對(duì)于放線菌和部分高G+C含量革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌應(yīng)對(duì)細(xì)胞壁化學(xué)組分進(jìn)行必要的分析。

必要時(shí)進(jìn)行序列測(cè)定。

2.酵母菌的復(fù)核鑒定

對(duì)于多數(shù)常用或常見(jiàn)的酵母菌，可依據(jù)表型信息對(duì)鑒定結(jié)果的正確性進(jìn)行核查。

(1)培養(yǎng)特性

菌落質(zhì)地、顏色、高度、生長(zhǎng)速度、對(duì)溫度的適應(yīng)范圍等。

(2)顯微形態(tài)觀察

如細(xì)胞大小和形態(tài)、無(wú)性繁殖方式、假菌絲形成與否；有性生殖方式、子囊孢子或擔(dān)孢子的形態(tài)特征。

(3)生理生化特征

可采用商業(yè)化的生化鑒定系統(tǒng)，或通過(guò)手工配制生理生化特性鑒定培養(yǎng)基，檢測(cè)菌種的生理生化特性。

必要時(shí)進(jìn)行序列測(cè)定。當(dāng)需復(fù)核的菌種缺少序列測(cè)定數(shù)據(jù)時(shí)，應(yīng)將測(cè)定26S rDNA D1/D2和ITS區(qū)的堿基序列作為復(fù)核鑒定的內(nèi)容之一。

3.霉菌的復(fù)核鑒定

霉菌的復(fù)核鑒定主要依據(jù)不同分類群的培養(yǎng)特征和顯微形態(tài)特征。

(1)培養(yǎng)特性

菌落(菌叢)質(zhì)地、顏色、菌落反面的顏色、生長(zhǎng)速度、氣生菌絲高度、對(duì)溫度的適應(yīng)范圍、色素的產(chǎn)生情況。

(2)營(yíng)養(yǎng)體細(xì)胞的構(gòu)造

顯微鏡觀察營(yíng)養(yǎng)體細(xì)胞的構(gòu)造。

(3)無(wú)性生殖或(和)有性生殖特征

顯微鏡觀察無(wú)性生殖或(和)有性生殖特征。