奶粉中雙氰胺檢測方法有哪些？

北京時間1月25日凌晨消息，新西蘭牛奶中發現了有害物質——雙氰胺。雙氰胺又名二氰二胺，縮寫DICY或DCD。雖然國際標準未對食品中的雙氰胺限量，但高劑量的雙氰胺對人體是有毒的。
本文采用Cleanert^® MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管（貨號：MS-DI5001）和Venusil^® HILIC液相色譜柱，建立了奶粉中雙氰胺的MAS-QuEChERS快速前處理方法和LC-UV以及LC-MS/MS檢測方法。

實驗部分
儀器和試劑
高效液相色譜儀，渦旋振蕩器，超聲波清洗機，氮吹儀。
雙氰胺標準品，Cleanert^® MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管，Venusil^® HILIC液相色譜柱，微孔濾膜，乙酸銨、乙酸、乙腈為色譜純，實驗用水為超純水。
實驗方法
提取、凈化
稱取1g試樣于50ml具塞離心管中，加入2ml水溶解后，加乙腈定容至10ml，超聲10min，8000r/min離心5min，取2ml上清液加Cleanert^® MAS-QuChERS-雙氰胺凈化管中，，渦旋0.5min，8000r/min離心5min，取上清液過0.22um濾膜，待測。

HPLC法：

色譜條件：
色譜柱：Venusil^® HILIC 5μm 100Å 4.6*250mm；
流動相：A：10mmol/L乙酸銨（pH=4.0）；
B：乙腈；
A：B=10:90；
檢測波長：220nm；
進樣量：10µl；
柱溫：30℃；
流速：1ml/min。

實驗結果：
線性關系和檢出限
準確稱取雙氰胺標準品50mg于50ml容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為標準貯備液；
分別量取一定量的標準貯備液，用乙腈稀釋，配置成濃度為0.1µg/ml，0.5µg/ml，1.0µg/ml，2.0µg/ml，5.0µg/ml和10.0µg/ml的標準溶液，按照上述色譜條件，依次進樣檢測。以標準溶液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，擬合線性方程，結果見表2：

檢測方法穩定性考察
選用10.0µg/ml的標準溶液連續進樣6針，計算其保留時間和峰面積的RSD值，結果見表3：

準確度和精密度
選取市售某品牌奶粉試樣，進行添加回收實驗，結果見表4

LC-MS/MS法：

色譜條件：
色譜柱：Venusil^® HILIC 5μm 100Å 2.1*150mm；
流動相：A：0.5mmol/L乙酸銨（pH=4.0）
B：乙腈
A：B=10:90
進樣量：10µl；
柱溫：30℃；
流速：0.2 ml/min。

質譜條件
質譜儀：API 4000+；
離子源：電噴霧離子源；
掃描方式：正離子掃描；
檢測方式：多反應監測；
CAD：8.00；
CUR：10.00；
GS1：60.00；
GS2：50.00；
IS：5500.00；
TEM：500.00。

實驗結果
線性關系和檢出限
準確稱取雙氰胺標準品50mg于50ml容量瓶中，加水溶液并稀釋至刻度，作為標準貯備液；
分別量取一定量的標準貯備液，用乙腈稀釋，配置成濃度為5ng/ml，10ng/ml，20ng/ml，50ng/ml，100ng/ml和500ng/ml的標準溶液，按照上述液質方法，依次進樣檢測。以標準溶液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，擬合線性方程，結果見下表6：

檢測方法穩定性考察
選用50.0ng/ml的標準溶液連續進樣6針，計算其保留時間和峰面積的RSD值，結果見表7：

準確度和精密度
選取市售某品牌奶粉試樣，進行添加回收實驗，結果見表8。采用空白樣品稀釋法判斷檢測方法的基質效應影響。空白凈化液稀釋和乙腈稀釋的標準溶液，雙氰胺峰面積和相對豐度比無明顯變化，故判斷該方法無基質效應的影響。

圖1 定性定量穩定性考察譜圖（HPLC法）

圖2 雙氰胺0.5μg/ml標準溶液譜圖（HPLC法）

圖3 奶粉空白譜圖（HPLC法）

圖4 奶粉10μg/g空白譜圖（HPLC法）

圖 5 10ng/ml雙氰胺標準溶液質譜圖

圖 6 奶粉空白質譜圖

剛在網上看見的，不知道靠譜不。

大家都用過哪些方法呢？給個您親身經歷過的真實案例吧。

年底了，還讓這個鬧得人心惶惶啊！！