使用ACQUITY UPC2系統測定氨苯砜片(Dapsone)的色譜含量
一、目的

使用沃特世Waters®))ACQUITY  UPC2™系統將藥典中氨苯砜含量的正相HPLC測定方法轉換為超臨界流體色譜(SFC)方法。

二、背景

目前，美國藥典(USP)規定了含有氨苯砜(4,4’-二氨基二苯砜，CAS #80-08-0)藥物片劑的正相HPLC分析方法。使用4.0 x 300 mm，10µm的硅膠柱(L3)進行等度分離，流動相為正己烷、異丙醇、乙腈和乙酸乙酯(7:1:1:1)的混合溶液。該方法的運行時間約為12.5min(最后一個主峰出峰時間的2倍，流速1.5mL/min)。如大多數藥典中的方法一樣，本方法經過驗證且可靠。但是，該方法使用了正己烷和乙酸乙酯溶劑。出于健康、安全和環保的原因，許多實驗室都想減少這些溶劑的使用。超臨界液體色譜(SFC)是一種正相色譜分離技術，其使用CO2作為主流動相，以極性溶劑(如甲醇)作為改性劑。由于SFC的原理與HPLC的原理相似，因此，目前的方法應該能夠轉換成SFC方法，減少溶劑的消耗和處理，降低每次分析的成本，同時增強了健康、安全和環境方面的保護。轉換成SFC的色譜方法必須保持數據質量，而且必須得到與目前正相色譜方法一致的實驗結果。

對尋求更高效、更低成本的氨苯砜片分析方法的實驗室而言，ACQUITY UPC2系統不愧為理想之選，該方法同時加強了健康、安全和環境方面的保護。

三、解決方案

使用目前美國藥典(USP)方法，制備和分析氨苯砜標準品和片劑樣品，如圖1所示(該樣品也用于SFC分析)。使用目前USP方法的分析結果與使用ACQUITY UPC2方法得到的結果進行對比，如圖2所示。


 

SFC方法的條件如下：

色譜柱： ACQUITY UPC2  BEH，3.0 x 50 mm，1.7µm

柱溫： 45 °C

流動相： 85% CO2:15% MeOH

流速： 3.0 mL/min,

背壓： 130 bar/1885 psi

檢測器： UV /PDA，254 nm

藥典方法所列出的適應性條件是最低要求(相對標準偏差不得大于2%)。標準品6次重復進樣，目前正相HPLC方法得到的保留時間和峰面積的相對標準偏差(%)分別為<0.1%，<1.1%。超高效合相色譜方法UltraPerformance Convergence Chromatography™(UPC2)重復6次進樣得到的實驗結果符合USP藥典系統適應性要求(保留時間RSD值0.8%，峰面積RSD值0.9%)，且運行速度(1.75 min)大大加快。兩種方法測定片劑樣品的分析結果高度一致。本例中，每次正相HPLC分析使用正己烷13.1mL，異丙醇、乙腈和乙酸乙酯各1.9mL 。相比之下，UPC2方法僅消耗約0.50mL甲醇。這說明了通過將正相色譜方法轉換為UPC2方法可以大大地減少有機溶液的使用。根據目前的溶劑價格，每次正相色譜HPLC分析成本大約為1.08美元；相比之下，UPC2僅為0.01美元。

四、總結

使用ACQUITY UPC2，可以成功地將美國藥典的HPLC方法轉換為UPC2方法。這種新的UPC2方法得到的數據與目前的HPLC方法相當，甚至更好；速度是目前的HPLC方法的7倍，并且消耗的溶劑更少。我們以更快的速度得到高品質的分析數據，則實驗室生產率提高，每個樣本的分析成本降低。ACQUITY UPC2系統是實驗室將目前的正相HPLC方法轉換為更高效、更省錢的UPC2的方法的一種理想的解決方案，同時也增強了健康、安全和環境方面的保護。