同位素標(biāo)記是一種重要的抗體標(biāo)記技術(shù)，牨977年Yalow等在放射免疫測定法所作突出貢獻(xiàn)而獲得醫(yī)學(xué)和生理學(xué)諾貝爾獎(jiǎng)。McAb標(biāo)記同位素后除應(yīng)用于放射免疫測定外，還可用于競爭結(jié)合試驗(yàn)、體內(nèi)腫瘤定位等。

 

　　一　原理

氯胺桾即對甲苯碘氯胺鈉，在水溶液中生成次氯酸，為一種溫和氧化劑，當(dāng)加入到有蛋白質(zhì)和碘的弱堿水溶液中，可將I２氧化為I＋并結(jié)合到氨基酸上。如標(biāo)記條件溫和，標(biāo)記后的McAb仍具有良好的結(jié)合活性，通過放射性同位素強(qiáng)度的測定可反映相應(yīng)抗原的含量。

 

　　二　方法

　　　　　　在細(xì)胞凍存管內(nèi)加入純化的McAb100μg／100μl，

　　　　　　再加入10μl 0.05M磷酸緩沖液

　　　　　　再加入10μl含1mCi125I

　　　　　　　　　　↓

　　　　　　加入10μl氯胺-T5mg／ml溶于0.05M

　　　　　　磷酸鹽緩沖液，孵育時(shí)間不超過30秒

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　加入100μl偏重亞硫酸鈉1.2mg／ml溶于

　　　　　　0.05M磷酸緩沖液

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　加入200μl　KI溶液少許結(jié)晶KI溶于0.05M

　　　　　　磷酸緩沖液＋4％牛血清白蛋白

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　用PD10柱Sephadex G25除去游離125I

　　　　　　用4％BSA　PBS洗脫

　　　　　　　　　　　　　↓

　　　　　　分部收集，0.5ml／管

　　每管取5μl進(jìn)行γ計(jì)數(shù)，計(jì)算標(biāo)記抗體的比活性和標(biāo)記率

　　　　　　　　　　　結(jié)合于McAb１２５I放射性強(qiáng)度cpm

　　　　標(biāo)記率％＝───────────────────

　　　　　　　　　　　　　　總放射性強(qiáng)度cpm

　　　　　　　　　　　　　　　　結(jié)合于某一管McAb上的放射性強(qiáng)度

　　　　比活性μCi／μgMcAb＝────────────────

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　某一管McAb總量

 

　　三　試劑器材

　　1.　純化后的McAb

　　2.　0.05M磷酸緩沖液，氯胺桾，偏重亞硫酸鈉，KI，BSA

　　3.　125I

　　4.　有通風(fēng)裝置的超凈臺(tái)，γ計(jì)數(shù)儀

5.　PD10柱Sephadex G25

 

　　四　注意事項(xiàng)

　　1.　嚴(yán)防同位素污染，工作人員必須穿著工作衣，戴口罩、帽子、手套。必須在嚴(yán)密的通風(fēng)櫥或通風(fēng)超凈臺(tái)中操作。操作前后對實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行監(jiān)測。所用125I和標(biāo)記物應(yīng)妥善保管。

　　2.　如標(biāo)記細(xì)胞因子、激素等，應(yīng)選用更溫和的標(biāo)記方法，使保持更好的生物學(xué)活性。